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DNA鑒定之變性梯度凝膠電泳(SNP分型方法和技術(shù)的檢測方法)

變性梯度凝膠電泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技術(shù)利用了由堿基序列所決定的DNA片段溶解度(或稱變性度)的差異,這種差異導(dǎo)致了電泳分離中泳動率的變異,從而達到分離野生型和突變型片段的目的。該技術(shù)可達到單堿基的分辨率。如果突變直接影響到雙鏈間的親和力(如堿基轉(zhuǎn)換),這種純合雙鏈與野生型雙鏈相比,將因溶解度的變化得到檢測。如果突變雙鏈的親和力變化不足夠突出(A—T類顛換),則以野生型和突變型序列的混合退火或共同PCR而形成異質(zhì)DNA雙鏈(heteroduplex),利用錯配位點形成的構(gòu)象變異所產(chǎn)生的去穩(wěn)態(tài)效應(yīng)達到分離的目的j異質(zhì)條帶總是滯后于相虛的純合條帶。DGGE技術(shù)檢測片段大于500bp,長度上優(yōu)于其他方法,幾乎可達100%的有效檢測率,無需放射標(biāo)記,是一種快速易行、最適于常規(guī)篩查小片段的突變檢測方法。現(xiàn)階段,存在三種類型的變性梯度凝膠電泳用于DNA突變檢測。第一種為垂直DGGE(濃度梯度方向垂直于電泳方向),主要用于選擇最佳的變性劑濃度;第二種為平行DGGE,該種凝膠的變性劑濃度范圍較小,便于更好地分離目的片段:第三種為最佳恒定變性劑濃度凝膠,便于優(yōu)化條件使突變差異顯著化。如果引物選擇審慎.可用DGGE分析技術(shù)在同一塊凝膠上分離多重PCR產(chǎn)物。

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